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生物实验外包前，为什么你qpcr每次检测结果都不一样？不少人会有这样的困惑，就是自己苦哈哈在PCR检测的时候，即使自己按照文献中的方法进行操作并使用相同的引物了，可就是qpcr每次结果都不一样，并且结果也不好，但把这个外包给相关的生物实验室，就基本没有这个问题了，这是怎么回事呢？
根据我们多年经验，总结了几个可能的原因：
第一，长期按压微量移液枪，你的大拇指关节就容易受损，这样就容易导致你的移液量有变化，而生物实验外包公司就会注意这点，吸取液体时，保持1-2秒，让弹簧有个缓冲时间。同时，在加模板时，也会注意提高模板加样量，以减少误差。
第二，生物实验外包公司在吸取液体时，会将枪头插入液面底部，而不是侧面。这样做的原因是如果插入侧面容易产生气泡，这可能会对微量的模板加样产生误差。
第三，做不好的原因的RNA的降解，RNA的完整性，一般体现在电泳过程中18S和28S的亮度上，如果这两个条带的RNA亮度变低，甚至没有，就说明RNA的完整性应该会有损失。RNA的完整性可能会受到影响，导致电泳过程中18S和28S的亮度降低。这可能是由于镁离子、pH、温度、紫外线、福尔马林等因素造成的。而且，短片段会比长片段扩增效率更高，所以，在进行qPCR引物设计时，生物实验外包公司都会尽量把片段设计得短一点，来降低RNA降解对结果的影响。
第四，在反转录过程和PCR过程中都可能存在抑制物，如Na离子、EDTA、SDS、酚、血红素、腐植酸等，这些抑制物会对qPCR结果产生影响。 |
