细胞的稳转株构建流程是怎么样的？

稳转细胞株是指经合适的药物浓度进行药物筛选后，得到外源DNA稳定整合到宿主染色体，并可以长时间表达外源目的基因的细胞。

稳定表达细胞株弥补了瞬时感染（或转染）实验中外源基因表达时间短的缺陷，便于长期观察。

细胞的稳转株构建中，稳转细胞的筛选需根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物，常用的抗性筛选有嘌呤霉素（puromycin）、潮霉素（hygromycin）、新霉素（neomycin）、灭稻瘟素（Blasticidin）等。

若实验需求构建稳转细胞株，我们建议通过慢病毒感染细胞进行药物筛选的方法，此方法较质粒转染可以更加有效的将外源基因整合入基因组，且整合位点处于转录相对活跃的区域，从而获得更加高效表达外源基因的稳转株细胞。

构建稳转细胞株有多重要？

①通过建立稳转细胞系，可以降低频繁转染或者病毒包装的成本，方便在目的细胞中研究基因功能实验研究；

② 区别于瞬时转染只能干扰表达，无法去除已表达的目的蛋白，构建稳转细胞系可以实现更好的基因干扰效果；

③ 瞬转会引入极高拷贝数的表达，导致因人为因素造成实验结果的不精确，建立稳转细胞系可以帮助筛选拷贝数适量的细胞进行实验研究；

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