裸鼠成瘤模型【动物实验外包】

裸鼠肿瘤模型是比较常见和常用的一种肿瘤动物模型，它在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。裸鼠肿瘤模型的接种一般有细胞接种和瘤块接种两种方式，接种取材有手术活检标本、癌性胸腹水标本和体外培养的细胞系三种。裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。

造模方法：

1、细胞是贴壁细胞，细胞培养在 RPMI-1640 培养基中，含 10%胎牛血清，100U/mL 的青霉素，100ug/mL 的链霉素，培养在 37℃含 5%CO2的细胞培养箱中。细胞传代培养：当细胞长至 80-90%时，去除培养基，加入 PBS 洗 1-2 次，去除 PBS后，加入 1ml 胰酶消化 1-3min 后，加入 3ml 完全培养基中和胰酶终止消化，将消化的细胞转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min。倒掉上清后，加入 3ml 培养基重悬细胞，1:3 传代至培养皿中培养。

2、将长到培养皿 80%-90%的细胞用胰酶消化下来，1000rpm 离心，去除上清，加入完全培养基重悬细胞，将细胞分别种在 6 孔板中，每孔种 1×105个细胞。

3、待细胞贴壁后，按照 MOI=1:10 的比例加入慢病毒感染细胞，感染 24h 后，去除含病毒的培养基，加入完全培养基。培养 48h 后，加入 puromycin 进行筛选。

4、将细胞进行扩增培养。待细胞长到指定数量时，将细胞用胰酶消化下来，1000rpm离心后，去除上清，加入 PBS 将细胞洗一遍，再次加入 PBS 重悬，对细胞进行计数，将数量调整为 2×107个细胞/ml。 

5、8周龄15只裸鼠适应性饲养7天后，随机分为3组，每组分别在右腋皮下接种2×106（100ul/只）细胞（细胞分为对照组细胞即未处理的细胞，NC 组细胞即感染 NC 病毒的细胞，shRNA 细胞即感染 sh-RNA 病毒的细胞）。接种约两周后出现肿瘤结节，每周用游标卡尺测量肿瘤大小两次。将裸鼠放入鼠笼中正常饲养 4 周后处死裸鼠，取裸鼠肿瘤拍照冻存。

哪些细胞能够成瘤？

目前验证过的细胞有HCT116，HePG2，A549，MKN45，AGS， CT26 ，NCI-H460，HT-29，SK-OV-3，MCF-7，B16，SGC7901，BEL-7402，BGC-823 ，PC-12等（细胞实验室可提供部分细胞，已确认）。

存在问题：为什么肿瘤不长？

如果细胞接种后超过预期的观察时间仍未成瘤，需要从一下方面进行排查原因：一是细胞活力，细胞活力是影响肿瘤形成的重要原因，活力不够不能成瘤，因此细胞消化下来PBS清洗后要尽快接种；二是动物选择，选择的裸鼠周龄不宜过大，否则也会增大成瘤难度（如果还未成瘤建议更换缺陷程度更高的Nod-scid小鼠，NOG小鼠）；三是饲养环境，环境影响动物状态，状态差的鼠容易发生死亡，不易成瘤。

为什么瘤子长起来又消失？

很可能开始我们观察到的肿瘤是炎症反应，到后来肿瘤细胞被小鼠自身吸收，需要继续观察肿瘤细胞吸收之后是否还能长出来，长不出来建议分析上述原因重新实验。

需要观察什么？

在肿瘤长出后，需要密切观察动物的状态，体重和瘤体积。瘤体积的测量一般采用公式V=ab2/2进行计算。动物体重的增加活着减少量，直接反应着动物的整体状态。

如何判断肿瘤是否出现了转移？

第一：病理剖检。如果肿瘤出现了转移，在肝脏或者肾脏等组织上肉眼可见明显转移灶。

第二：小动物活体成像。如果接种的肿瘤细胞带有荧光标签或者荧光素酶，可以借助小动物活体成像仪进行观察瘤细胞的大小和转移情况。

第三：小动物核磁。小动物核磁技术可以更明细那地观察到肿瘤细胞在肝脏，肺脏或者其他器官的转移情况。