|
实验室常用细胞凋亡检测方法有哪些?专业的细胞凋亡检测公司告诉你!目前,实验室进行细胞凋亡检测方法有很多,比如有电镜检测、有DNA凝胶电泳、ELISA法检测、流式细胞仪定量分析、Western blot检测等等,今天就和细胞凋亡检测公司慧登生物一起来看看吧。 1、DNA凝胶电泳 细胞凋亡时,其染色质会发生浓缩,染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂,形成180~200bp整数倍的寡核苷酸片段,在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱(DNA ladder)。所以,我们可以通过提取DNA、电泳、UV下可见DNA ladder。 这个方法比较适用于体外培养的非增殖性细胞的检测,在细胞凋亡检测公司也用的比较多。 2、ELISA法检测 凋亡细胞的DNA断裂使细胞质内出现核小体。核小体由组蛋白及其伴随的DNA片断组成,可由ELISA法检测。 实验检测步骤依次是: ① 将凋亡细胞裂解后高速离心,其上清液中含有核小体; ② 在微定量板上吸附组蛋白体; ③ 加上清夜使抗组蛋白抗体与核小体上的组蛋白结合; ④ 加辣过氧化物酶标记的抗DNA抗体使之与核小体上的DNA结合; ⑤ 加酶的底物,测光吸收值。 此方法在细胞凋亡检测公司也用的也比较多,因为其敏感性高、操作也比较简单。 3、Annexin V/PI双染色法 磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)位于正常细胞膜的内侧,但在细胞凋亡早期,PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin V是一种Ca2+依赖性磷脂结合蛋白,对PS具有高度亲和力,可与PS特异性结合,因此Annexin V常作为检测细胞早期凋亡的指标。将荧光标记(FITC、PE或EGFP)的Annexin V作为探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。Annexin V经FITC标记后可发绿色荧光。碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)染色液是一种不能穿透细胞膜的红色荧光染料,可对凋亡晚期细胞及坏死细胞染色。 经Annexin V-FITC和PI联合染色后,正常细胞基本无荧光(Annexin V-/PI-),绿色荧光的是早期凋亡细胞,绿色和红色荧光则是晚期凋亡的和坏死的细胞。这个方法,目前在绝大多数细胞凋亡检测公司中都有用到。 好了,由于篇幅有限,关于实验室常用细胞凋亡检测方法就说到这了,大家还有疑问的,可直接咨询长沙生物实验室慧登生物公司的客服,24小时在线免费咨询! |
