细胞凋亡检测实验时，如何通过电镜正确观察凋亡细胞？

今天，长沙细胞凋亡检测公司慧登生物给大家分享下，我们在进行细胞凋亡检测实验时，如何通过电镜正确观察凋亡细胞，希望能够对大家有帮助~

首先，我们先介绍下凋亡细胞的变化特点吧！

凋亡细胞除染色质发生变化外，其亚细胞结构也出现相应的变化，如核破裂，形成电子密度增强的膜包体；细胞膜芽生出泡，凋亡小体形成等，这些变化在分辨率较高的电子显微镜下就能很好显示。

细胞凋亡检测实验进行电镜观察时，需要用到以下仪器和设备！

材料方面，需要已诱导凋亡的细胞，染缸、10ml的锥形离心管、500ml锥形瓶、塑料棒蕊、胶囊、10ml吸管、吸管橡皮球等；试剂方面，需要准备好消化液（0.02%EDTA）、PBS、蒸馏水、琼脂糖、乙醇-树脂（1：1）、树脂、醋酸铀-柠檬酸铅、4%多聚甲醛/0.1mol/L磷酸缓冲液、1%锇酸（二甲胂酸钠缓冲液配制）、梯度乙醇这些；设备方面则是需要准备微波炉、离心机、恒温烤箱、超薄切片机、透射电镜。

细胞凋亡检测实验进行电镜观察时的实验步骤如下：

1、制备琼脂离心管：用蒸馏水将琼脂配成20g/L溶液，加热溶解。灌入10ml的锥形离心管，其中央竖放一下端尖细的棒蕊，凝固后抽出棒蕊，备用。

2、收集细胞：将消化的贴壁细胞放入离心管，1000r/min离心5min，弃上清液，用冷PBS（4℃）洗，5mlPBS悬浮细胞并将其加入琼脂离心管。2000r/min离心15min，弃上清液。

3、固定：加入适量的4%多聚甲醛固定15min后取出离心管中的琼脂块，用刀修出含细胞团的琼脂块（可放入含4%多聚甲醛的小瓶，在4℃下长期保存）。

4、洗涤：PBS（4℃）洗3×5min。

5、固定：1%锇酸（4℃）固定30min。

6、洗涤：蒸馏水（4℃）洗3×5min。

7、脱水：30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、100%乙醇（I）和100%乙醇（Ⅱ）各2min。

8、浸透：1：1的乙醇：树脂60min，100%的树脂2×60min。

9、包埋：将胶囊放置60℃恒温烤箱2h，将包埋剂灌入胶囊并放置标签；将细胞团的琼脂块移至胶囊的中央，静置，使其自然沉降至胶囊的底部后，置于60℃恒温烤箱48h。

10、切片。

11、染色：醋酸铀-柠檬酸铅染色。

12、电镜：TEM下观察。

在电镜下观察，我们可以明显的看到，早期凋亡细胞的核染色质边集于核膜周边呈新月形，晚期凋亡细胞可见凋亡小体。好了，关于细胞凋亡检测实验时，如何通过电镜正确观察凋亡细胞的相关问题今天就说到这了，大家还有疑问的，可直接咨询长沙细胞凋亡检测公司慧登生物的客服，24小时在线免费咨询！