细胞增殖实验之软琼脂克隆形成实验

众所周知，由于细胞生物学性状不同，克隆形成能力也会有很大的差别，比如一般正常细胞克隆形成能力弱，而肿瘤细胞克隆形成能力相对正常细胞则会更强，那我们如何检测细胞的增殖能力呢？

湖南长沙细胞实验公司慧登生物告诉你，可以进行细胞克隆形成实验来检测细胞增殖能力。而根据克隆形成依据采用的培养介质的不同，我们又可以把其实验的方法分为平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验两类。今天就重点和湖南长沙细胞实验公司慧登生物来了解下软琼脂克隆形成实验怎么做吧！

软琼脂克隆形成实验适用于贴壁生长的细胞，所以，软琼脂培养法常用检测肿瘤细胞和转化细胞系。

细胞增殖实验之软琼脂克隆形成实验操作流程如下：

1、提前配置1.2%和0.7%琼脂（Agarose 加蒸馏水配置），高压灭菌后4摄氏度冰箱保存。湖南长沙细胞实验公司慧登生物提醒：铺板当天微波炉或烘箱加热融化，置于37摄氏度培养箱中。

2、铺下层胶：按1：1比例混匀1.2%Agarose和20%1640，6孔板每孔取2mL混合液，在室温条件下等待冷却凝固。

3、取对数生长期细胞，消化配置成单细胞悬液，计数后将细胞数调整为5*10^4/mL。

4、铺上层胶：按1：1比例使0.7%Agarose和20%1640培养基混匀，取2mL混合液于EP管中，向管中加入10-20微升细胞悬液，充分混匀后加入已铺下层胶的6孔板中，待上层琼脂凝固后，放在37摄氏度培养箱中培养2-3周，每三天向孔板中加入200微升培养基。

5、显微镜下拍照，统计克隆直径并作图。

细胞增殖实验之软琼脂克隆形成实验，湖南长沙细胞实验公司慧登生物提醒，5个方面要注意，否则直接影响最终实验结果！

1、细胞一定要吹打分散成单细胞悬液；

2、接种时细胞密度不可过高；

3、软琼脂与细胞混合时温度不可超过40摄氏度，容易烫伤甚至烫死细胞；

4、软琼脂对热和酸不稳定，所以如果实验中我们反复加热，这样的行为很容易使其降解并产生毒性，其硬度也会下降，所以，湖南长沙细胞实验公司慧登生物提醒，对其高压灭菌后进行分装；

5、铺板操作时速度要快，以免造成局部凝固。

总的说来，细胞增殖实验之软琼脂克隆形成实验的操作过程虽然简单，但我们也要多注意刚提及的细节部分，不然还是很容易导致实验结果不理想，得不到想要的图片，好了，软琼脂克隆形成实验今天就说到这了，大家还有疑问的，可直接咨询湖南长沙细胞实验公司慧登生物客服，24小时在线免费咨询。