大鼠淋巴组织细胞表面抗原的流式检测怎么做？

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长沙流式细胞实验外包公司慧登生物，今天就跟大家介绍下大鼠淋巴组织细胞表面抗原的流式检测具体应该怎么做吧！

样品制备：

1、取出大鼠淋巴组织块，迅速浸泡在10ml的缓冲液中，并用注射器的活塞研磨或使用两块预冷的载玻片研压成单细胞。

2、把悬液转移到50ml的锥形管中静置片刻，使细胞团块和碎片沉降到管底，并通过尼龙网过滤成单细胞悬液。

3、在4℃下300-400g离心4-5分钟，除去上清液。

4、长沙流式细胞实验外包公司慧登生物提醒，如果该样品为脾脏细胞，则需要用分离液分离出淋巴细胞。

5、加入50ml 缓冲液重悬细胞后计数，根据需要用台盼蓝(Trypan Blue)进行细胞活性检测。

6、离心细胞液并除去上清；用适量的缓冲液重悬细胞为2×107个/ml。采用直接标记的一抗，则加入CD19/FITC抗体（0.5-1ug/106细胞）冰上孵育5-10分钟。

细胞荧光染色步骤:

1. 在每个流式检测管或板式微孔中加入50ul的稀释后的一抗；在空白管/孔或同型对照管/孔中加入50ul 缓冲液。长沙流式细胞实验外包公司慧登生物提醒，若进行抗体最佳浓度测试，建议范围2-0.03ug/106细胞。

2. 在各管/孔中分别加入50ul细胞悬液（约106细胞），并轻轻混匀。

3. 避光冰浴或在4℃冰箱中孵育20分钟。长沙流式细胞实验外包公司慧登生物提醒，有些抗体可能需要更长的孵育时间，建议进行预试验。

4. 孵育完成后，加入缓冲液（每流式检测管中加2ml，而每微孔中加200ul） 4℃下300-400g离心5分钟，并弃去上清。

5. 重复洗涤过程3次。

6. 重悬细胞后，上流式仪检测，若使用直接标记一抗，用500ul 缓冲液重悬细胞后，上机检测。

7. 试验结果分析。

以上就是大鼠淋巴组织细胞表面抗原的流式检测的详细操作步骤了，记住，选择一家合适的有经验的流式实验外包公司是实验成功的关键，那么长沙流式细胞实验外包公司哪家好呢？长沙流式细胞实验外包公司慧登生物就很不错，能够为大家提供专业的流式细胞实验外包服务。如果你有任何疑问，可直接咨询长沙流式细胞实验外包公司慧登生物客服，24小时在线免费咨询！