WB实验这些问题要注意！不然失败了别跟我哭！

做WB实验时，每个细节都至关重要，稍有不慎，就可能满盘皆输~所以，在情况允许的情况下，可以考虑WB实验外包公司协助，但WB实验外包公司哪家好呢？长沙生物实验室慧登生物，拥有经验丰富、技术娴熟的技术团队，能够提供高质量的WB实验外包公司服务。

今天WB实验外包公司长沙生物实验室慧登生物就来跟大家说说WB实验中的哪些环节哪些问题我们要格外注意吧~

一、蛋白样品制备环节

蛋白质的样品制备是WB实验的第一步，这时候，我们应注意以下问题：

1、在合适的盐浓度下，应保持蛋白质的最大溶解性和可重复性；

2、选择合适的表面活性剂和还原剂，破坏所有非共价结合的蛋白质复合物和共价二硫键，使其形成各自多肽的溶液；

3、尽量去除核酸，多糖，脂类等分子的干扰，在裂解完毕离心之后小心取中层澄清溶液，WB实验外包公司长沙生物实验室慧登生物提醒，不要吸到底层沉淀和上层脂类；

4、WB实验外包公司长沙生物实验室慧登生物提醒，制备过程必须在低温下进行，以避免细胞破碎释放出各种酶类的修饰；

5、样本制备完后分装保存，WB实验外包公司长沙生物实验室慧登生物提醒，不要反复冻融。

二、电泳环节

1、条带出现微笑现象(中间凹两边翘起)：主要是凝胶中间部分凝固不均所致，应待凝胶充分凝固后电泳；

2、条带出现“皱眉”现象(中间鼓坡两边向下)：两玻璃板之间底部气泡所致，应排除底部气泡；

3、带出现拖尾现象：主要是样本溶解效果不佳，分离胶浓度过大，电泳缓冲液放置时间过长。WB实验外包公司长沙生物实验室慧登生物建议，加样前离心，选择适当的样本缓冲液，加适量的样品促溶剂；使用新配置的电泳缓中液，降低凝胶浓度或使用梯度凝胶。

三、封闭环节

电泳转膜过后，膜上其他没有结合蛋白质的空白位置需要用封闭液加以封闭，以避免一抗或二抗非特异性结合。

1、WB实验外包公司长沙生物实验室慧登生物提醒，封闭时间不能过长也不能过短，封闭时间过长(过度封闭)导致抗原表位的遮蔽，从而降低检测灵敏度，封闭时间过短(不完全封闭)又会导致最终背景增高或信噪比太低；

2、封闭液中应加入适量的防腐剂，避免封闭蛋白变性影响封闭效果。

以上，就是我们进行WB实验需要多注意的几个方面了，如果你对WB实验还有要疑问，也可直接咨询WB实验外包公司长沙生物实验室慧登生物客服，24小时在线免费咨询！