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WB实验条带老是出问题?有经验的实验外包公司是这么解决的!做WB实验真的太头疼了,条带老是出现杂带、背景不干净等等”乱七八糟“的问题,今天湖南长沙WB实验外包公司慧登生物说的这些问题,你有遇到过吗? 1、没有任何显色 发生这种情况的原因有很多,如果单纯一张没有任何显色的X光片,最可能是一抗加成其他抗体,或者二抗种属加错了。 湖南长沙WB实验外包公司慧登生物的解决办法:仔细检查抗体是否加错,确认转膜没有问题。 2、高背景 封闭不够好,一抗浓度高,洗膜时间和次数不够。 湖南长沙WB实验外包公司慧登生物的解决办法:降低一抗浓度,增加洗膜时间和次数。 3、非特异性条带 一抗非特异性与蛋白结合。 湖南长沙WB实验外包公司慧登生物的解决办法解决办法:更换一抗。 4、条带中出现边缘规则的白圈 电转中膜和胶之间存在气泡。 湖南长沙WB实验外包公司慧登生物的解决办法:转膜前去掉膜和胶之间的气泡。 5、出现黑点和黑斑 膜上其他部位与一抗或者二抗非特异性结合。 湖南长沙WB实验外包公司慧登生物的解决办法:封闭牛奶一定要纯,封闭结束之后要洗,建议封闭结束之后洗3遍之后再加一抗,。 6、条带拖尾 蛋白量太大,一抗浓度和时间太长。 湖南长沙WB实验外包公司慧登生物的解决办法:根据情况调整蛋白量,同时一抗浓度和时间也可以缩短。 7、出现重影 荧光强度比较高,在压片时,放好之后不小心又轻微移动了一段距离。 湖南长沙WB实验外包公司慧登生物的解决办法:放好了千万别动,强迫症犯了也别动,放歪了没关系的。 8、出现非均一性背景 膜可能曾经干过。 湖南长沙WB实验外包公司慧登生物的解决办法:在封闭的时候,洗一抗,洗二抗,以及发光的时候都时刻需要注意蛋白面不要风干。 9、某个条带变形 SDSPAGE胶中存在气泡或者某不溶性颗粒。 湖南长沙WB实验外包公司慧登生物的解决办法:配胶过程中要小心,使用无杂质的液体。 10、条带呈哑铃状 配置胶有问题,也可能是样品中含有太多杂质,没有离心下来。 湖南长沙WB实验外包公司慧登生物的解决办法:如果是配置胶有问题,那坚决更换不用。 11、最边缘条带弯曲 电泳电流不均一。 湖南长沙WB实验外包公司慧登生物的解决办法:换用新的电泳槽,不使用两边的两孔,另外上样最好在胶的中间。 当然,我们在实验中遇到的问题肯定不止这些,如果你还有其他实验问题,也可直接咨询湖南长沙WB实验外包公司慧登生物客服,24小时在线免费咨询! |
