流式细胞分选实验，怎么做才是正确的！

如果你需要对细胞进行细致观察和分析的话，流式细胞分选实验那就要上场了！

因为流式进行细胞分选的话，它可以允许研究人员根据细胞的特定特性，如大小、形态、表面标记或内部分子表达，快速分离出目标细胞群体，可以很有效的帮助科研人员进行研究。

那问题来了，这流式细胞分选实验的原理是什么呢？ 

当荧光染色或标记的单细胞悬液放入样品管中，被高压压入流动室内。

流动室内充满鞘液，在鞘液的包裹和推动下，细胞被排成单列，以一定速度从流动室喷口喷出。

在流动室的喷口上配有一个超高频的压电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测细胞就分散在这些液滴之中。

将这些液滴充以正、负不同的电荷，当液滴流经过带有几千伏的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，没有充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。

弄清楚流式细胞分选实验原理了，接下来就看看流式细胞分选实验具体操作步骤吧！

收集和清洗细胞，制备成单细胞悬液（以外周血为例）：

1、收集一管抗凝外周血，置于15mL离心管中，并加入等量PBS溶液稀释，用吸管充分吹打混匀；

2、于另一个15mL离心管中加入等体积PBMC分离液；

3、将6mL稀释后的全血样品缓慢加入PBMC分离液上层，注意：倾斜45度缓慢加入，不可用力过大，避免将全血样品混入PBMC分离液中；

4、置入离心机中，配平，800离心30min；

5、离心后，缓慢取出离心管，于超净台内用吸管微吸出与白膜层靠近的少部分上清液；

6、继续用1mL移液枪将白膜层吸出，转移至另一新的15mL离心管中，加入10mLPBS溶液稀释，用吸管充分吹打混匀(目的:尽可能稀释、去除可能混有的PBMC分离液和血浆;

7、置入离心机中，500g 离心5min;

8、弃上清，再加入10mLPBS，吹打混匀，500g 离心5min，留取细胞沉淀，即PBMC；

9、PBMC用PBS溶液重悬。

根据需要进行细胞标记：使用特异性荧光染料或抗体标记目标细胞。注意抗体要达到饱和溶度，避光孵育30min后，加入1mLPBS，500g 离心5min，用于后续仪器分析。

流式细胞分选实验的设备设置：

1、打开流式分选仪，预热并进行设备自检。

2、设置实验参数，包括液流压力、激光和光电倍增管的配置。

3、荧光补偿调整：由于不同荧光标记的光谱重叠，需要进行补偿调整，确保信号的准确性。

4、样本上机：根据细胞特性设置阈值，如前向散射（FSC）和侧向散射（SSC）来排除细胞团块和碎片。

好了，关于流式细胞分选的实验操作步骤就说到这了，如果大家对其他实验还有不明白的，或者是需要实验协助指导的，可以直接咨询靠谱的长沙细胞实验外包公司慧登生物实验室客服，24小时在线免费咨询。