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肠癌小鼠模型如何构建,实验中有什么要注意的?

肠癌小鼠动物模型的构建方法有哪些呢?实验中有哪些问题我们要格外注意呢?下面就让长沙动物模型构建公司慧登生物实验室给大家说说吧!


推荐方法一、AOM/DSS诱导法构建肠癌小鼠模型


实验步骤:


AOM注射:第1天,将小鼠称重并标记,实验组小鼠腹腔注射AOM(10 mg/kg)。AOM用无菌水溶解,配制成10 mg/mL的储存液,分装后置于-20℃保存,使用前用无菌生理盐水1:10稀释。


DSS处理:注射AOM后,用常规饮用水喂食小鼠1周。接着,用2.5%浓度的DSS溶液替换饮用水,喂食1周。之后,再用常规饮用水喂食2周。重复上述DSS处理过程3次,整个周期为9周。


观察与记录:在实验过程中,长沙动物模型构建公司慧登生物实验室提醒,一定要定期观察小鼠的体重变化、粪便情况(如是否有腹泻、便血等),并记录。


结果分析:


实验结束后,取小鼠结肠组织进行病理切片,通过苏木精-伊红(HE)染色观察组织的病理变化。长沙动物模型构建公司慧登生物实验室提醒,正常结肠组织结构完整,而诱导成功的肠癌模型会出现黏膜增厚、腺体结构紊乱、细胞异型性明显等特征。


并且,统计小鼠结肠肿瘤的发生率和肿瘤数量,与对照组进行比较,以评估AOM/DSS诱导的效果。


推荐方法二、细胞移植法构建肠癌小鼠模型


实验步骤:


细胞准备:检查培养的CT26细胞的形态和增殖情况。当细胞活性在90%以上,数量达到5×10^6时,用PBS或无血清培养基重悬,放置在含碎冰的泡沫盒中,保持细胞活性。


皮肤处理:用剃毛器剃除小鼠侧腹部皮肤,以便接种细胞。


细胞接种:混匀细胞悬液,缓慢轻柔地抽取计算好的细胞体积,长沙动物模型构建公司慧登生物实验室提醒,这个时候一定要避免产生气泡。左手保定小鼠,暴露待接种部位,用湿棉球擦拭消毒。右手持注射器,进针长度约为针头的1/3,小幅度摆动针头,钝性分离皮下组织,缓慢推入细胞悬液,使接种部位出现圆形隆起。停顿两秒后,旋转针头拔出。


后续观察:接种后,定期监测小鼠的健康状况和肿瘤生长情况,记录肿瘤的体积、生长速度等参数。


结果分析:


根据记录的肿瘤体积数据,绘制肿瘤生长曲线,观察肿瘤的生长趋势。并取肿瘤组织进行病理切片,通过HE染色等方法观察肿瘤的组织学特征,确认肿瘤的形成和性质。


当然了,实验中,长沙动物模型构建公司慧登生物实验室提醒大家,这些问题要格外注意:


1、在细胞移植法中,确保细胞活性在90%以上,细胞数量和接种体积要准确,否则可能影响成瘤率。


2、在AOM/DSS诱导法中,DSS的浓度和处理时间要严格按照实验方案执行,过高或过低的浓度、过长或过短的时间都可能影响模型的诱导效果。


3、在实验过程中,要遵循动物伦理原则,尽量减少小鼠的痛苦和不适,合理安排实验操作,确保实验动物的健康和安全。


以上两种方法,大家可以按需选择。如果大家还有不明白的或者是需要实验协助指导的,可以直接咨询长沙动物模型构建公司慧登生物实验室客服老师哦!



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