流式细胞术实验常见问题答疑！

众所周知，流式细胞术有着能够快速测定细胞悬液中单个细胞的生物学性质，并可以对特定的细胞进行分选收集，所以广泛用于细胞生物学，免疫学，遗传学，基础医学等领域。但是对于新手来说，初次做这个流式实验会遇到诸多问题，今天就让长沙医学实验外包公司慧登生物实验室来给大家说说吧~

1、样品处理需要注意哪些？

长沙医学实验外包公司慧登生物实验室提醒，未固定的样本应立即实验。根据实验目的选择最佳固定方法，避免因固定剂造成检测结果不稳定，新鲜组织标本应及时处理保存，以免在室温下放置时间过长，导致组织坏死及细胞自溶，从而影响检测结果。

2、如何确定样品是否需要破膜？

可通过蛋白信息数据库或其他文献查询蛋白在细胞/正常组织/癌变组织中的表达情况，以确定后续实验中该选取什么样品（细胞）来进行实验，以及是否使用破膜剂/破核膜剂来处理样品（细胞）。

3、流式染色时间和温度如何选择？ 

流式染色是抗原抗体的结合反应，该过程结合非常快，而且非常牢固，但染色过程要尽量让所有抗原都能结合抗体分子，所以长沙医学实验外包公司慧登生物实验室提醒，我们加入抗体时一定要混匀，一般选择室温染色15 min或者4℃染色30 min，染色中途混匀一次，轻弹管子（不要用枪头吹打，这操作可能会对细胞受损，死细胞增多，导致非特异性结合增加）。

4、FCM检测过程中如何调节补偿？ 

长沙医学实验外包公司慧登生物实验室提醒，在FCM检测过程中，如果存在多色，则必须进行荧光补偿调节。调节补偿首先要知道双阴性细胞的情况，其次，必须要用单阳和双阴性细胞。只有在有阴性细胞作为参照的情况下，才能既不会过多又不会过少地调节补偿。

5、细胞内染色选用什么样的荧光素？ 

对于胞内染色，应选用分子量较小的荧光素。

6、补偿过高或增益过低导致无信号/荧光弱怎么办？ 

使用阳性对照再次设置补偿或在合理的范围内提高增益以增强信号。

好了，关于流式细胞术实验常见问题就说这些了，如果大家还有不明白的或者是需要实验协助指导的，可以直接咨询长沙医学实验外包公司慧登生物实验室客服老师哦！